Выявляемость генотипов вируса папилломы человека высокого канцерогенного риска при раке и предраковой патологии шейки матки

vyyavlyaemost genotipov virusa papillomy cheloveka vysokogo kancerogennogo riska pri rake i predrakovoj patologii shejki matki Симптомы

Принято считать, что этиологической причиной рака шейки матки (РШ) являются вирусы папилломы человека (ВПЧ) из группы высокого канцерогенного риска, которые, согласно обширным международным исследованиям, выявляются почти в 100% случаев рака шейки матки. Однако есть также данные о заболеваемости ВПЧ-отрицательными новообразованиями, процент которых не превышает 10% в плоскоклеточных карциномах и более 10% в аденокарциномах. Может ли ВПЧ отсутствовать в опухолевой ткани или просто не определяться из-за низкой чувствительности тестов на ВПЧ, еще полностью не выяснено.

Есть два разных объяснения существования рака, отрицательного по отношению к ВПЧ. Первый основан на предположении, что канцерогенез в этих опухолях происходит без участия вируса, но инициируется другими факторами, вызывающими канцерогенез. Другое объяснение связано с трансформирующим действием вируса на клетки. Вирусная ДНК интегрируется в геном клетки, дестабилизируя его, но когда трансформированные клетки бесконтрольно делятся, интегрированная вирусная ДНК удаляется, в результате чего образуются клоны опухоли, не содержащие последовательностей вирусной ДНК.

Сторонники не-HPV-отрицательной точки зрения RSCC считают, что тесты на HPV, используемые для обнаружения и генотипирования, обладают недостаточной чувствительностью, поскольку они не обнаруживают все типы вирусов. В международной практике для исследования наличия различных генотипов ВПЧ в образцах RRM используются тесты на ВПЧ на основе полимеразной цепной реакции с использованием универсальных праймеров (GP5 + / GP6 + или SPF), которые расположены в области L 1 ген ВПЧ и распознают большинство α групп генотипов ВПЧ, включая оба типа с высоким и низким канцерогенным риском. Обнаружение генотипов ВПЧ осуществляется путем гибридизации на фильтрах, к которым прикреплены образцы ДНК, специфичные для отдельных генотипов ВПЧ. Аналитическая чувствительность обнаружения довольно высока, но зависит от типа ВПЧ. В присутствии двух генотипов ВПЧ в образце, один в высокой концентрации, а другой в гораздо более низкой концентрации, эффективность амплификации второго типа ДНК может быть снижена из-за конкурентного взаимодействия. Например, если образец содержит высококанцерогенный ВПЧ типа 18 в 103 геномах и низкоканцерогенный ВПЧ типа 73 в 10 8 геномах, ВПЧ 18 типа вряд ли будет обнаружен, а тип 73 может быть ошибочно принят за этиологическую причину RRH и классифицирован как канцерогенный тип ВПЧ в эпидемиологической классификации. Чтобы избежать этой ошибки, рекомендуется использовать ПЦР с типоспецифичными праймерами для обнаружения и определения генотипов ВПЧ. Более того, учитывая, что во время трансформации клетки вирусом только часть вирусного генома (чаще область гена E6-E7) может быть включена в геном человека, а остальные гены (E1, E2, а иногда и L1 ) могут быть потеряны, праймеры, обычно специфичные для генотипирования HPV, следует выбирать в области гена E6-E7.

С другой стороны, фрагменты опухолевой ткани чаще всего используются в качестве клинического материала для молекулярно-эпидемиологических исследований, которые не всегда собираются с помощью одноразовых инструментов. В этой ситуации повышается риск перекрестного заражения уже на этапе сбора клинического материала или позже, когда различные манипуляции производятся одновременно на нескольких клинических образцах. Например, если большинство клинических образцов содержат наиболее распространенный ВПЧ 16 типа при раке в высоких концентрациях, образцы, которые изначально не содержали этот тип, могут содержать фоновые концентрации из-за контаминации. Поэтому при использовании тестов на ВПЧ с высокой аналитической чувствительностью выявляется доминантный тип, что может привести к ошибочному заключению, что этот генотип является основной причиной рака. Чтобы избежать этой ошибки, следует использовать тесты генотипирования для оценки количества ДНК ВПЧ, обнаруженной для разделения.значимый тип ВПЧ от незначительного типа, который может присутствовать из-за фонового загрязнения образцов.

Для выявления и генотипирования ВПЧ с высоким канцерогенным риском в клинических образцах мы разработали тест-систему ПЦР «Система FRT генотипа ВПЧ AmpliSense позволяет дифференцировать 12 генотипов ВПЧ с высоким канцерогенным риском в мультиплексном формате с использованием типспецифических праймеров, расположенных в E6- Е-область 7 генов ВПЧ и результаты обнаружения

ПЦР в реальном времени. Тест-систему ПЦР характеризовали с использованием панели контрольных образцов, содержащих как специфические, так и неспецифические типы ВПЧ в различных концентрациях.

Цель исследования — оценить с помощью разработанной тест-системы частоту встречаемости различных генотипов ВПЧ риска в образцах эпителия шейки матки с тяжелой дисплазией и первичным раком на разных стадиях развития в клинических образцах от пациентов из Москвы и Московской области.

Материал и методы.

Материал исследования состоял из образцов цервикального эпителия, собранных с помощью цитостеров и перенесенных в транспортную среду Cytoscreen System (Сероа, Италия) для жидкостной цитологии или в транспортную среду AmpliSense для сбора образцов из урогенитального тракта женщин. Все образцы были проверены гистологически. Всего 125 образцов были протестированы как B-IP / H-SIL (CIN 2/3), 22 образца были протестированы как карцинома in situ / CIS, 81 образец был протестирован как плоскоклеточный рак / SCCa (46 образцов были в 1-м месте). , 2 и 35 на стадиях 3, 4), и 10 образцов были протестированы как аденокарцинома / AdCa. Материал собирали только у ранее не леченных женщин с впервые диагностированным заболеванием.

Наборы реагентов «DNA-sorb-A» для культуральной среды AmpliSense и образцы «DNA-sorb-D» для культуральной среды Cytoscreen System использовались для извлечения ДНК из клинических образцов. Для обнаружения, определения и генотипирования ВПЧ использовали тест-систему «AmpliSens HPV VCR genotype FRT». Образцы без ДНК VKR HPV были протестированы с помощью ПЦР с использованием универсальных праймеров MY11 / MY09 и GP5 + / GP6 + в формате вложенной ПЦР с последующим секвенированием амплифицированной ДНК для определения генотипа HPV.

Результаты обнаружения ДНК ВПЧ 12 генотипов ВПЧ с высоким канцерогенным риском (HCR) в протестированных клинических образцах представлены в Таблице 1 и на Рисунке 1. Результаты определения процента образцов с генотипами 16, 18 и 45 в каждая группа клинических образцов по отношению к образцам, содержащим другие генотипы, показанные на рисунке 2.

Оцените статью
Добавить комментарий